3 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Количественный анализ на вирус гепатита с как сдать

Шаг 1. Анализы для лечения гепатита С

Содержание статьи:

ПЦР Качественный

Для чего сдавать?

Показывает наличие РНК вируса гепатита С в крови.

  • Обычный — 60 или 100 МЕ/мл.
  • Ультрачувствительный — 10 или 15 МЕ/мл.

Лучше выбрать чувствительность 60 и менее МЕ/мл

Антитела гепатита С показывают, что организм когда-то сталкивался с вирусом – но неизвестно, есть ли вирус в организме сейчас или иммунитет его уже переборол. Чтобы узнать, есть ли гепатит С в крови на данный момент, следует сдать анализ, который выявит РНК вируса гепатита С в крови . Анализ называется ПЦР качество (полимеразная цепная реакция).

По европейским рекомендациям лучше сдавать анализ 15 МЕ/мл (чувствительность), но для первого анализа на обнаружение гепатита достаточно сдать и 60.

ПЦР Количественный

Для чего сдавать?

Необходимо узнать вирусную нагрузку в крови (концентрацию вируса), чтобы контролировать динамику лечения.

  • до 400 тысяч (4*10^5) МЕ/мл — низкая вирусная нагрузка;
  • до 800 тыс. (8*10^5)МЕ/мл — средняя;
  • выше 800 тысяч МЕ/мл — высокая.

Следует знать изначальную вирусную нагрузку, чтобы контролировать в случае возникновения непредвиденных проблем в течение терапии.

Генотипирование РНК вируса гепатита С

Для чего сдавать?

Анализ определяет генотип и подтип генотипа вируса.

  • Метод исследования — ПЦР Real time.
  • Материал для исследования — Венозная кровь с ЭДТА.

Напрямую влияет на препараты, которые будут подобраны для лечения. Генотип не меняется в течение жизни, и в редких случаях у человека может быть несколько генотипов (например, 2).

Генотипов несколько: от 1 до 6 (иногда выделяют 11), при этом у первого есть подтипы: 1а и 1б, которые могут лечиться разными препаратами в зависимости от тяжести течения и наличия сопутствующих заболеваний.

Фиброскан или эластография

Для чего сдавать?

Определить состояние печени перед началом лечения.

Значение анализа (F — фиброз)*:

  • F0 5,8 кПа и меньше;
  • F1 5,9 — 7,2 кПа;
  • F2 7,3 — 9,5 кПа;
  • F3 9,6 — 12,5 кПа;
  • F4 – 12,6 кПа и больше, цирроз печени.

Если нет возможности пройти эластометрию, необходимо провести как минимум УЗИ органов брюшной полости для выявления явных патологий.

Эластометрия печени показывает структуру печени, оценивает её функциональные показатели. Она позволяет выявить количество здоровой ткани печени в соотношении к фиброзу. Пациентам с фиброзом F3 и F4 может быть назначен удвоенный курс Софосбувира и Даклатасвира 24 недели, либо к терапии на 12 недель может быть добавлен Рибавирин, либо она может быть продлена до 16 недель.

*Интерпретация степени фиброза в зависимости от плотности строго зависит от конкретного аппарата и может существенно отличаться. Например, плотность 10кПа для аппарата EPIQ 7G может соответствовать степени фиброза F2 по шкале METAVIR.

Биохимический анализ крови

Для чего сдавать?

Оценить работу внутренних органов.

Значение анализа по важным пунктам:

! Плохие показатели — повышение значений по этим пунктам.

Билирубин общий норма — 3,4 — 17,1 мкмоль/л

АсАТ (АСТ, аспартатаминотрансфераза) норма:

  • Женщины — до 31 Ед/л;
  • Мужчины — до 37 Ед/л

АлАТ (АЛТ, аланинаминотрансфераза) норма:

  • Женщины — до 34 Ед/л;
  • Мужчины — до 45 Ед/л.

Некоторые лекарственные препараты вызывают тяжёлый стресс, так же как и занятия активными видами спорта могут незначительно исказить показатели биохимического анализа.

Общий анализ крови (ОАК)

Для чего сдавать?

Определить общее состояние здоровья человека и выявить возможные патологии.

Нужен самый обычный анализ крови, не развёрнутый.

Этот анализ включает в себя:

  • определение концентрации гемоглобина;
  • величину гематокрита;
  • концентрацию эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в крови.

Первые 3 анализа из списка ниже — обязательные

Здесь приведены анализы, которые необходимо сдать перед для того, чтобы начать лечение гепатита С Софосбувиром в сочетании с дополнительными препаратами. Это стандартный набор анализов, и он не включает в себя случаи коинфекций с ВИЧ, гепатитом Б и другими заболеваниями.

  1. Генотипирование РНК ВГС,
  2. РНК ВГС количественный,
  3. Фиброскан или эластография,
  4. Биохимический анализ крови,
  5. Общий анализ крови.

Во время лечения и после него не нужно сдавать анализы на антитела/маркеры гепатита С. Антитела — это косвенный признак, который свидетельствует о том, что ваш организм когда-то сталкивался с гепатитом С. РНК вируса не будет обнаруживаться после излечения, но несмотря на то, что уровень антител будет постоянно снижаться, они могут остаться на всю жизнь.

Анализы рекомендуем сдавать в клиниках, соответствующих современным требованиям и стандартам. Наиболее известные из них следующие:

Подберите схему лечения, приобретайте препараты
— и вперёд, к минусу!

Когда все анализы будут у вас на руках, обратитесь к хорошему инфекционисту или гепатологу. Специалист назначит препараты и укажет длительность лечения, опираясь на результаты анализов. Можете самостоятельно ознакомиться с одобренными схемами лечения Европейской ассоциации заболеваний печени и рекомендациями Ассоциации Изучения Болезней Печени США.

Обратитесь за бесплатной консультацией по телефону к опытному гепатологу от компании Zydus. Так Вы сможете услышать независимое мнение о Вашем лечении и проверить рекомендации Вашего врача.

Бесплатное консультирование проводится в рамках проекта «МойГепатит», созданного индийским фармгигантом Zydus Heptiza, для информирования населения России о современных способах борьбы с вирусом гепатита С, а также для организации доступа россиян к новейшей противовирусной терапии.

Анализ ПЦР на гепатит С

Гепатит С переходит из острой фазы в хроническую в 80% случаев. Репликация болезнетворных вирусов в функциональных клетках печени ведет к дисфункции органа. Это обусловлено тем, что паренхиматозная ткань заменяется соединительной. В результате анамнез больного дополняется кровотечениями в ЖКТ, интоксикацией организма, проблемами со свертываемостью крови. Поэтому чем раньше будут диагностированы патологические изменения, тем больше у пациента шансов на выздоровление. Анализ ПЦР на гепатит С считается наиболее точным методом исследования.

Этот диагностический метод разрешено проводить спустя несколько дней после заражения. Полимеразная цепная реакция позволяет достоверно определить генотип и концентрацию вируса в крови. Чтобы сделать анализ, у пациента берут биологический материал, в котором может присутствовать РНК возбудителя.

ПЦР на гепатит С осуществляют в три этапа:

  • Качественный анализ – с его помощью определяют генетический материал возбудителя.
  • Количественное исследование – таким образом выявляют вирусную нагрузку.
  • Генотипирование – на этой стадии врач узнает разновидность заболевания.

Методику разработали около 30 лет назад. Ее применяют для диагностики многих инфекционных заболеваний. ПЦР позволяет обнаружить уникальный генетический материал. Для этого используют праймеры. Так называют короткие нити РНК, которые присоединяют к началу гена.

Анализ ПЦР

В результате количество фрагментов болезнетворного вируса многократно увеличивается. Каждая фаза требует особого температурного режима и определенного промежутка времени. Молекула ДНК формируется в течение 3 минут. Амплификация включает в себя около 30 циклов. ПЦР делают в лаборатории посредством специального оборудования.

Показания к назначению

Сдача анализа ПЦР может быть обусловлена наличием клинических симптомов гепатита С. Процедура показана людям, которые:

  • контактировали с инфицированным человеком;
  • страдают от острых и хронических заболеваний печени;
  • проходят лечение от патологических изменений в паренхиматозной ткани;
  • входят в группу риска;
  • являются донорами крови и ее компонентов.

ПЦР осуществляют не только при гепатите С. Анализ используют в медицине, биологии, криминалистике. Определение специфических показателей – этап, необходимый для подбора лекарственной схемы.

Преимущества анализа

В схему диагностического обследования включают иммунофлуоресцентный анализ и ПЦР. С помощью первого можно определить концентрацию иммуноглобулинов. Эти вещества вырабатываются защитным механизмом после проникновения болезнетворных вирусов в организм. В отличие от ПЦР ИФА не обладает эффективностью во время инкубационного периода. С помощью полимеразной цепной реакции гепатит С можно выявить в первые 7 дней после инфицирования.

Данное клиническое исследование обладает следующими характеристиками:

  • Минимальная вероятность ложного результата.
  • Высокая эффективность.
  • Специфичность.
  • Чувствительность.
  • Универсальность.
  • Автоматизация процесса.
  • Безопасность.
  • Скорость получения показателей.

Единственным минусом ПЦР является ее техническая сложность. Это связано с тем, что врачу необходимо подобрать правильный состав нуклеотидов, в функциях которых синтез ДНК. Из-за повышенной чувствительности метода возможно получение ложноположительного или ложноотрицательного результатов.

Чтобы добиться точности значимых показателей, биологический материал тщательно очищают от медикаментозных препаратов и белковых соединений. Для подтверждения результата требуется сравнение ранее проверенных образцов. К факторам, провоцирующим ошибку, причисляют:

Нарушение техники забора анализа

  • Нарушение техники забора анализа.
  • Изменения в последовательности фрагментов РНК.
  • Совпадение синтезируемых нуклеотидов и генов болезнетворных вирусов.

Вероятность получения ложного результата при гепатите С присутствует из-за невозможности определения генетической основы заболевания. ПЦР-диагностика позволяет напрямую выявить возбудителя. С помощью амплификации ДНК происходит обнаружение болезнетворных микроорганизмов в продуктах питания, воде и почве.

Ограничения, касающиеся данного метода, не уменьшают его эффективности и популярности. Клиническое исследование проводят регулярно. Таким образом врач может оценить эффективность принятых лечебных мер. Необходимость в этом возникает из-за того, что вирус гепатита С способен мутировать. Отсутствие положительного эффекта означает адаптацию вируса к применяемым лекарственным средствам.

Подготовка к сдаче

Для того чтобы провести полимеразную цепную реакцию у больного, страдающего от гепатита С, берут венозную кровь. Обычно для изучения требуется две порции биологического материала. Посредством одной делается непосредственно ПЦР, а другую направляют на иммуноферментный анализ.

Кровь для анализа ПЦР берут из вены

Подготовка имеет большое значение. Пациент сдает кровь на ПЦР утром на голодный желудок. За несколько дней до процедуры придется отказаться от вредных продуктов питания, спиртных напитков, никотина и наркотиков. Больному следует избегать половых контактов, чрезмерной физической и эмоциональной нагрузки. Бассейн и спортзал оказываются под запретом. Подготавливаться придется в любом случае.

Существуют особые указания относительно медикаментозных препаратов. Это касается антибиотиков и антидепрессантов. Женщины, у которых начались менструации, должны отсрочить сдачу анализа на гепатит С. Кольпоскопия также является поводом для отказа от процедуры.

Перечисленные правила довольно просты. Благодаря им, можно добиться максимальной достоверности данного диагностического метода. Расшифровывать результаты должен специалист. Самостоятельно интерпретировать их у пациента вряд ли получится.

Читать еще:  Причины и предрасполагающие факторы

Процесс сдачи анализа

ПЦР-диагностику осуществляют следующим образом:

Кровь помещают в термостат

  • Сначала забирают биологический материал. Кровь помещают в простерилизованные приспособления. Необходимый объем не превышает 1-1,5 мл. Держать кровь и ее компоненты следует не дольше 24 часов. Температура хранения не должна превышать 4 градусов по Цельсию.
  • После начинают клиническое исследование. Подготовленную кровь помещают в термостат вместе с амплификационной смесью. Обычно требуется не более 25 мл специального состава. Амплификация проводится в автоматическом режиме на протяжении нескольких часов.
  • Параллельно делают контрольные анализы. Для этого используют биологические материалы, взятые у здорового человека. Это поможет избежать ложных результатов.
  • Расшифровка и регистрация показателей. Генетический материал обнаруживают с помощью бромистого этидия. Благодаря специфическому воздействию, фрагменты ДНК высвечиваются. Наличие (отсутствие) вируса выявляют ориентируясь на данные таблицы.

Расшифровка результатов

Определить значение полученных показателей может только инфекционист и гепатолог. Анализ ПЦР вводят диагностический комплекс вместе с биохимическим исследованием крови, УЗИ, ИФА и биопсией. Диагноз ставят на основании всех результатов. Порядок расшифровки анализов зависит от этапа диагностического обследования.

Ультразвуковая диагностика

На первой стадии ПЦР положительным результатом теста считается обнаружение фрагментов ДНК болезнетворного вируса. При проведении количественного анализа определяют уровень вирусной нагрузки. Она может быть низкой (менее 8*10^5 МЕ/мл), средней (от 8*10^5 МЕ/мл), высокой (больше 2,4*10^7 МЕ/мл). Нормой (отрицательным результатом) считается отсутствие специфических антител и частиц вирусной РНК. На этапе генотипирования об инфекционном заражении свидетельствует РНК определенного генотипа.

При получении положительного результата больному назначают эффективную терапевтическую схему. При этом обязательно учитывают информацию о наличии вируса в крови, степени его активности и генотипе. Цена процедуры зависит от методики тестирования, вида биологического материала. К общей стоимости могут быть добавлены затраты за забор крови или других жидкостей. Последнее обусловлено тем, что возбудителя часто обнаруживают в урине, каловых массах и сперме.

ПЦР на гепатит С

ПЦР (или полимеразная цепная реакция) — это введенный Кэри Муллисом (США) лабораторный способ диагностики ДНК и РНК возбудителя. Достаточно всего одной молекулы, обнаруженной в коже или биологической жидкости, чтобы высокочувствительный ПЦР-анализ выявил вирус-возбудитель.

Виды ПЦР

ПЦР-анализ крови при ХВГС бывает трех видов — качественный, количественный и анализ, определяющий генотип вируса.

Качественный ПЦР-анализ на гепатит С проходят те пациенты, у которых ИФА-анализ выявил антитела к ХВГС. Результат качественного ПЦР-анализа обозначается словами «РНК обнаружена» или «РНК не обнаружена». Выявить в крови минимальное количество возбудителя способны тест-системы, чья чувствительность составляет не менее 50 МЕ/мл. При меньшей концентрации вируса анализ может дать ложноотрицательный результат. Во избежание ошибки лаборатории, специализирующиеся на ПЦР-диагностике, необходимо оснащать тест-системами высокой чувствительности. Например, лаборатория «Инвитро» использует тестовые системы с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Пациенты и врачи имеют право требовать от сотрудников лаборатории данные о чувствительности тестов.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С нужен, чтобы определить концентрацию вируса в крови (или степень виремии). О результате исследования говорят цифры. Если в 1 мл крови найдено 2 млн. МЕ, то результат выглядит следующим образом — 2×10*6 МЕ/мл. Некоторые лаборатории используют другой показатель — число копий на 1 мл крови (1 МЕ — это 4 копии РНК). Получается, что 2×10*6 МЕ/мл равняется 8×10*6 копий РНК вируса (8 млн. копий) в 1 мл крови.

При генотипировании определяется, к какому из шести генотипов принадлежит вирус. Именно генотип возбудителя влияет на клиническую картину, скорость появления осложнений и дальнейший прогноз для пациента. Правильное определение генотипа вируса дает возможность выбрать комбинацию препаратов и определить длительность курса лечения.

Показания для анализа

Чтобы подтвердить наличие ВГС, назначается ПЦР-анализ, помогающий обнаружить возбудителя и начать лечение. Показания для назначения:

  • У пациента обнаружены признаки воспаления печени.
  • Проводятся скрининговые профилактические исследования.
  • Необходимо обследовать людей, контактирующих с больными гепатитом.
  • Диагностируются гепатиты смешанного происхождения, и надо определить главный возбудитель.
  • Определяется уровень активности размножения возбудителя у хронических больных.
  • У пациента диагностирован цирроз.
  • Необходимо оценить эффективность проводимой терапии.

Подготовка к ПЦР-диагностике гепатита

Процедура проводится утром натощак, кровь берется из вены.

Пациент должен следовать следующим правилам:

  • Не употреблять пищу за 10 часов до процедуры. Разрешается пить только чистую воду.
  • Не курить за 4 часа до манипуляции и не употреблять спиртное за сутки до анализа.
  • Избегать физических и психологических нагрузок перед процедурой.
  • Не принимать лекарственные препараты в течение 2 дней перед забором крови. Если пациент по каким-либо причинам принимал лекарства, то об этом надо уведомить лаборанта (употребление отдельных препаратов вызывает ошибочно положительный результат).

Расшифровка результатов ПЦР-исследования

Расшифровка ИФА- и ПЦР-анализа — это задача для гепатолога или инфекциониста. Требуются также результаты биопсии, биохимического анализа крови и УЗИ. Расшифровать результаты ПЦР-анализа может только квалифицированный врач, который должен на их основании назначить терапию. Таблицы расшифровки вирусной нагрузки при гепатите С приводятся ниже.

Качественный анализ. Расшифровка

ОбнаруженоПациент инфицирован, т.к. в его биологическом материале найдена РНК вируса.
Не обнаруженоПациент не инфицирован, либо количество РНК вируса находится ниже границы чувствительности.

Количественный анализ. Расшифровка

Не обнаруженоЧеловек здоров. РНК вируса в биоматериале не найдена, либо ее концентрация ниже границы чувствительности.
До 1,8*10^2 МЕ/млКонцентрация РНК вируса находится ниже диапазона количественного определения. В таком случае требуется осторожность при интерпретации результата. Часто необходимо провести повторное исследование.
До 8*10^5 МЕ/млНизкий уровень вирусной нагрузки при гепатите С. Как правило, снижение концентрации вируса говорит об успешном лечении.
Больше 8*10^5 МЕ/млВысокий уровень вирусной нагрузки при гепатите С.
Больше 2,4*10^7 МЕ/млПоскольку количество РНК вируса выходит за верхнюю границу диапазона количественного определения, определить уровень вирусной нагрузки нельзя. Нужен повторный тест с разведением образца крови.

Обнаружена РНК определенного генотипаВ биоматериале пациента найден вирус гепатита С, относящийся к определенному генотипу и субтипу. Результат обозначается цифрами и латинскими буквами: 1а, 2b и т.д. Существует 7 генотипов и 67 субтипов. В России из 7 генотипов встречаются первые 3.
Обнаружена РНК вируса гепатита СВ биоматериале пациента найдена РНК нетипичного для России генотипа вируса, поэтому требуются дополнительные исследования.
Не обнаруженоЧеловек здоров, либо в его крови очень низкая концентрация РНК вируса.

Иногда ПЦР-анализ отрицательный, но при этом ИФА-анализ говорит о наличии антител к вирусу. Это значит, что переболевший острым гепатитом С человек смог излечиться самостоятельно. Около 20-ти случаев инфицирования при сильном сопротивлении организма инфекции заканчиваются самопроизвольным излечением.

В некоторых ситуациях результаты высокоточного ПЦР-анализа могут быть искажены:

  1. Нарушения температурного режима и других условий транспортировки крови в лабораторию.
  2. Загрязнение образца крови.
  3. Присутствие следов гепарина и других антикоагулянтов в крови.
  4. Присутствие ингибиторов в биоматериале (полимеразная цепная реакция замедляется или останавливается).

Преимущества ПЦР-анализа

Во-первых, это метод ранней диагностики, который позволяет выявить генетический материал вируса. ИФА-анализ способен определить только вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию вещества (иммуноглобулины). С момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель и даже месяцев, и в этот период ИФА-анализ неэффективен. ПЦР-анализ уже на первой неделе инфицирования дает ответ.

Второе преимущество ПЦР-анализа — низкая вероятность ошибки. При исследовании определяют характерный только для одного вида возбудителей участок генетического материала, что дает возможность исключить ложный результат. ИФА-анализ показывает наличие антител, которые выделяются против разных вирусов (перекрестные антитела).

Недостатки ПЦР

Каким бы эффективным ни было исследование, у него есть свои минусы:

  • В ходе ПРЦ-исследования генетический материал возбудителей (в том числе неживых) реплицируется, а это приводит к искажению результатов. Чтобы оценить эффективность лечения с помощью ПЦР-анализа, повторное исследование проводится как минимум через 2 месяца после предыдущего. Организм пациента должен быть «очищен» от погибших вирусов.
  • Тест-системы определяют часть вирусного генома, которая теоретически может принадлежать другим вирусам или микроорганизмам, следовательно, существует вероятность ложноположительного результата.
  • Быстрая мутация вирусов иногда опережает способность тестовых систем определять геном возбудителя, следовательно, есть вероятность ложноотрицательного ответа.

Производители лабораторных тест-систем регулярно проводят их испытания, выясняя, как системы реагируют на перекрестные реакции или какой-либо генотип вируса.

Цена ПЦР-анализа на гепатит С

В государственных учреждениях пройти анализ можно бесплатно, требуется только направление от гепатолога или инфекциониста.

Платное исследование доступно во всех крупных городах РФ. На цену влияет тип исследования, используемое оборудование, необходимое для анализа время.

В Москве и Санкт-Петербурге качественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 600 до 900 рублей, в области — от 300 до 800 рублей.

Количественный ПЦР-анализ на гепатит С стоит от 17000 до 22000 рублей, на гепатит В — от 1200 до 10000 рублей.

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР-анализа на гепатит С, надо обращаться только в зарекомендовавшие себя лаборатории. В этом случае вопрос стоимости исследования отходит на второй план.

Количественный анализ на гепатит С: как подготовиться, расшифровка, норма

Количественная ПЦР – молекулярно-биологический анализ, при котором подсчитывается количество генетического материала возбудителя в крови. Исследование на гепатит С (количественно) выполняется после подтверждения диагноза для определения вирусной нагрузки. Полимеразная цепная реакция характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Поэтому анализ считается золотым стандартом в диагностике гепатита С.

Что такое количественный анализ на гепатит С

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – анализ, который основан на определении участков РНК или ДНК, специфичных для возбудителя инфекции. В качестве исследуемого материала чаще используется венозная кровь. Тест обладает высокой специфичностью, так как при исследовании плазмы выявляется генетический материал конкретного вируса.

Метод полимеразной цепной реакции впервые был запатентован в 1983 году Кэри Мюллисом. Внедрение в клиническую практику молекулярно-биологического анализа совершило переворот в диагностике бактериальных, грибковых и вирусных болезней.

ПЦР количественный при гепатите С – исследование, при котором подсчитывается количество РНК ВГС (HCV RNA). По результатам определяют вирусную нагрузку, от которой зависят:

  1. дозировка медикаментов;
  2. продолжительность противовирусной терапии (ПВТ);
  3. вероятность осложнений;
  4. успешность лечения.
Читать еще:  Некроз печени симптомы причины развития лечение

РНК вируса гепатита С (ВГС) обнаруживается спустя 10-12 суток после заражения, когда до первых симптомов еще далеко. Поэтому исследование применяется для ранней диагностики HCV-инфекции.

Когда нужно сдать тест

Молекулярно-биологический анализ назначается при положительном результате скринингового обследования на гепатит – ИФА и качественной ПЦР. Исследование применяется для:

  • подтверждения диагноза;
  • определения уровня виремии (вирусной нагрузки);
  • прогнозирования течения болезни;
  • оценки результативности лечения;
  • диспансерного обследования после ПВТ.

ПЦР-диагностика рекомендована всем людям с вирусным гепатитом. Точность исследования варьируется в пределах 97-99%, поэтому риск ложных результатов минимален.

Показания для анализа:

  • обнаружение антител к вирусу гепатита С (anti-HCV);
  • признаки воспаления печени;
  • качественное выявление РНК ВГС;
  • острый и вялотекущий гепатит;
  • микст-гепатиты.

Количественный тест выполняется на всех этапах заболевания. Чтобы оценить результативность терапии, вирусную нагрузку определяют перед, во время и после ПВТ. Если уровень виремии высокий, увеличивается риск цирроза и рака печени. Поэтому для профилактики осложнений назначают антивирусные средства в больших дозах.

Подготовка и сдача крови

Количественный анализ ПЦР проводится в лабораторных условиях. Домашних тестов для выявления числа вирусов в крови не существует.

Объективность результатов зависит от правильности подготовки к исследованию. Чтобы снизить вероятность погрешностей, нужно:

  1. сдавать венозную кровь натощак;
  2. выполнять процедуру до 12 часов дня;
  3. не есть за полсуток до визита в лабораторию;
  4. отказаться от газированных напитков и кофе в день обследования.

Забор крови у женщин рекомендуется выполнять за 1-2 дня до менструации. В этот период иммунная защита ослабевает, поэтому сывороточная концентрация возбудителя максимальная.

За 5-7 суток до анализа исключают алкогольные напитки, жирную и острую пищу. Врачи не советуют курить за 2-3 часа до забора крови.

Точность ПЦР-диагностики на гепатит С во многом зависит от правильности сбора и транспортировки биоматериала:

  • забор крови осуществляют в условиях процедурного кабинета;
  • пользуются только одноразовыми стерильными шприцами;
  • для исключения заражения биоматериала соблюдают правила асептики и антисептики.

Контейнер с пробой маркируют в присутствии пациента, после чего отправляют в лабораторию.

Как выполняют подсчет вирионов

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

  1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
  2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
  3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.

Результаты количественного определения РНК

Количественная оценка позволяет судить об уровне виремии, то есть активности вирусного процесса. С учетом результатов анализа гепатолог подбирает дозу лекарства, определяет продолжительность терапии гепатита С.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С:

Данные количественной ПЦР, в МЕ/млТрактовка
не обнаруженовариант нормы, вируса в крови нет
менее 150содержание РНК ниже линейного диапазона концентраций, минимальная вирусная нагрузка
150-3*10 4низкий уровень виремии
от 3*10 4 до 8*10 5средняя вирусная нагрузка
более 8*10 5содержание РНК ВГС выше линейного диапазона концентраций

Вирусная нагрузка – важный показатель, который учитывается при разработке схемы терапии. Если уровень виремии минимальный или низкий, прогноз течения гепатита и результативности ПВТ благоприятный. Ситуация ухудшается при средней и высокой вирусной нагрузке. Такие пациенты подвержены осложнениям – фиброзу, жировому гепатозу, циррозу.

Уровень виремии не отражает степень повреждения печеночной паренхимы или тяжесть течения гепатита. Чтобы определить серьезность изменений в печени, прибегают к инструментальному обследованию – фибросканированию, биопсии и гистологическому анализу.

Сколько по времени делается качественный и количественный анализ и примерная цена

Чтобы провести исследование на гепатит С (качественный и количественный ПЦР-анализ), посетите лабораторное отделение поликлиники, частную клинику или лабораторию. Стоимость диагностики в Москве зависит от:

  1. типа анализируемого биоматериала;
  2. чувствительности применяемой тест-системы;
  3. количества определяемых инфекций.

Примерная стоимость лабораторного анализа

Тип анализаЦена в рублях
забор крови170-200
качественная ПЦР750-1000
количественная ПЦР (реал-тайм)3800-4000
генотипирование1350-1400

Анализ ПЦР на гепатит С делается не более 3 часов. Забрать окончательные результаты можно уже в течение 1-2 суток.

Бывает ли ложный результат

Генетический материал возбудителя гепатита выявляется в крови спустя 1.5 недели после заражения. До этого периода содержание РНК ВГС в крови так мало, что ее нельзя обнаружить в лабораторных условиях. Для оценки вирусной нагрузки рекомендуется пользоваться высокочувствительными тест-системами: 150-1*10 8 МЕ/мл.

ПЦР-диагностика – исследование, достоверность результатов которого достигает 97-99%. Искажение данных возможно при:

  1. игнорировании правил подготовки к исследованию;
  2. нарушении требований антисептики;
  3. несоблюдении методики анализа крови;
  4. неправильном заборе и хранении биоматериала.

Перед обследованием пациент должен сообщить врачу о приеме медикаментов, так как их компоненты могут влиять на активность возбудителя и результаты исследования.

ПЦР-диагностика – высокоточное исследование, при котором определяют наличие и количество копий возбудителя инфекции. Получение ложноотрицательных результатов почти невозможно. Погрешности выявляются в единичных случаях при диагностике хронического гепатита вне обострения.

Анализ ПЦР на гепатит С

Гепатит С – серьезная болезнь, которая разрушает печень. Она может привести к циррозу печени. Между началом заболевания и тем моментом, когда начнут вырабатываться антитела, может пройти до полугода, поэтому диагностировать заболевание с помощью иммуноферментного анализа невозможно. Своевременно определить болезнь и начать лечение поможет анализ ПЦР на гепатит С.

Показания к исследованию

Когда нужно сдать анализ:

  • если иммуноферментный анализ дал положительный результат;
  • у пациента наблюдаются симптомы цирроза или поражения печени: она меняется в размере, селезёнка становится больше, в области живота видны расширенные вены, кожа желтеет, наблюдаются боли в правой части живота;
  • активность АЛТ и АСТ в анализе крови повышена;
  • перед тем, как начать лечение, для того, чтобы определить количество вируса в крови инфицированного;
  • чтобы следить, насколько эффективной оказалась терапия. После лечения – чтобы контролировать состояние здоровья и избежать рецидива;
  • если диагностирован гепатит В, чтобы исключить смешанное поражение печени;
  • после полового акта с человеком, зараженного гепатитом.

Цели обследования

Цель ПЦР (или полимеразной цепной реакции) – изучить состав крови и обнаружить флавивирус (гепатит С). Существенный плюс этого анализа в том, что он распознаёт вирус на той стадии, когда он ещё не начал процесс необратимых реакций. ПЦР позволяет увидеть, насколько сильно поражён организм, показывает качественные характеристики и определяет генотип вируса. Всё это позволяет назначить максимально подходящее лечение для каждого конкретного случая.

Разновидности анализов

ПЦР на выявление гепатита С подразумевает несколько исследований:

  • качественного анализа;
  • количественного анализа;
  • генотипирования.

Качественный анализ

ПЦР ещё называют качественным анализом. Если он показывает отрицательный результат, значит, распознать вирус в организме нельзя, так как его содержание меньше, чем оборудование может уловить. В такой ситуации нужно определиться, насколько реагент чувствителен, чтобы скорректировать дальнейшее решение.

Анализ может показать положительный результат уже приблизительно через пять дней после того, как человек заразился.

Количественный анализ

Этот вид исследования анализа демонстрирует уровень вирусной нагрузки, т. е. концентрацию флавивируса в теле – сколько фрагментов вируса приходится на 1 кубический см крови пациента.

Этот вид анализа ПЦР назначается больному перед тем, как начать противовирусную терапию, или после трёх месяцев лечения, чтобы посмотреть, насколько эффективен назначенный курс.

Этот вид анализа показывает:

  • насколько велика опасность заразить другого человека, эта вероятность прямо пропорциональна показаниям вирусной нагрузки;
  • какое лечение подойдёт в этом случае, и насколько оно будет плодотворным;
  • длительность лечения – чем выше концентрация вирусов, тем дольше будет терапия.

Пациенту стоит знать, что тяжесть заболевания может не зависеть от уровня вирусной нагрузки. Иногда даже при высокой концентрации вирусов в крови пациента, печень оказывается поврежденной лишь в незначительной степени. Однако если у беременной женщины высокий уровень вирусной нагрузки, то велика вероятность передать заболевание своему ребёнку.

Считается, что нижняя норма концентрации РНК-вируса – до 600.000 МЕ/мл, среднее – от 600.000 до 700.000, высокое – от 800.000 и выше.

Генотипирование

Из-за того, что этот вирус подвержен высокой мутации, в ходе исследования очень важно определить, какой конкретно генотип находится в крови человека. Всего существуют 11 генотипов гепатита С и множество их подвидов. Но на территории России распространены всего три: 1, 2 и 3.

Генотипирование даёт возможность определить, насколько устойчивым оказался вирус. От этого зависит метод лечения.

Все генотипы гепатита С по-разному реагируют на лечение. 1 генотип лечится минимум год, а шанс выздороветь – около 60%. Генотипы 2 и 3 лечатся по полгода, а вероятность избавиться от недуга – около 85%.

Кроме того, генотипирование даёт возможность посмотреть, в каком состоянии находится печень больного. Например, накапливание в печени жира указывает на то, что пациент страдает от 3 генотипа вируса.

Читать еще:  Норма алт и аст в крови расшифровка анализов

Анализ крови на данной стадии показывает цифру, которая характеризует генотип. Изредка случается, что определить генотип не получается, и в ответах из лаборатории указано «не типируется». Это означает, что человек страдает от генотипа, нераспространенного в этой географической зоне. Чтобы обнаружить его, придётся сдать анализ еще раз, но с той системой диагностики, которая сможет его распознать.

Процесс расшифровки результатов

В анализах ПЦР на гепатит С, полученных из лаборатории, обычно указывают определённые данные, и расшифровать их можно даже самостоятельно:

  • обнаружено/не обнаружено (качественный анализ);
  • количество вирусов (количественный анализ);
  • цифра генотипа;
  • название теста.

Считается, что наибольшее внимание следует уделить второму пункту, так как исходя из этих показателей, можно сделать прогноз, определить продолжительность лечения и его тип.

Несмотря на понятность анализа, нельзя самостоятельно ставить себе диагноз и заниматься самолечением, результаты анализа нужно показать лечащему врачу.

Как подготовиться к сдаче анализа

Для того чтобы получить достоверный результат, важно соблюсти ряд правил:

  1. Сдавать анализы стоит утром натощак (постараться поесть в последний раз минимум за 8 часов до процедуры).
  2. Нельзя перед сдачей крови пить что-то, кроме воды.
  3. За два дня нужно исключить жирные и жареные продукты, а также алкоголь.
  4. Минимум за час лучше отказаться от сигарет.
  5. Не рекомендуется сдавать анализы после массажа, УЗИ или рентгена.
  6. За день до обследования пациент должен отказаться от медицинских препаратов, физической активности и эмоциональных нагрузок.
  7. Полчаса перед обследованием стоит провести спокойно и расслаблено.

На скорость проведения обследования ПЦР влияет то, каким из типов вируса страдает пациент, каким методом проводится анализ крови. В зависимости от сложности результаты анализов больной может получить через несколько часов или несколько дней. Но обычно это не занимает больше 7 суток.

На стоимость ПЦР-исследования влияет статус клиники, куда пациент обратится, и от того, насколько сложным будет проведение анализа. Цена варьируется от 400 рублей до 11 тысяч.

Пациенту важно знать, что есть такое понятие, как отрицательно ложные анализы. Это может произойти, если кровь на анализ был сделан неправильно, с нарушением правил, или транспортировался ненадлежащим образом (например, попал в лабораторию больше, чем через два часа после забора). При такой ситуации больной рискует получить ложное представление о состоянии своего здоровья и потерять драгоценное время.

Поэтому крайне важно выбрать максимально подходящую клинику, которая печётся о своей репутации и не может позволить себе халатного отношения к пациентам. Перед тем как определиться, стоит почитать отзывы об учреждении и его персонале. Выбор лучше остановить на престижной и известной клинике – вероятность ошибки в этом случае будет мала.

Анализ ПЦР на гепатит С

Для постановки диагноза «хронический вирусный гепатит С (ХВГС)» требуется комплексное обследование человека, которое включает клинические, лабораторные и инструментальные исследования. Важным с точки зрения диагностики для постановки правильного диагноза является метод ПЦР – полимеразная цепная реакция.

Что показывает этот анализ и зачем он нужен?

Этим лабораторным методом обнаруживают РНК вируса гепатита С в крови человека. Вместе с иммуноферментным анализом (ИФА) на антитела к вирусу, ПЦР используют для постановки диагноза ХВГС и генотипа его возбудителя. Это исследование является одним из новейших методов лабораторной диагностики. Его достоверность при ХВГС превышает 97%, что считается очень хорошим показателем для исследований.

Существует три ПЦР анализа крови при ХВГС: качественный, количественный и генотипирование вируса. Первое исследование (качественный анализ) на вирус обнаруживает его в крови, поэтому используется только для постановки диагноза.

Второе (количественное) исследование определяет степень вирусной нагрузки на организм, поэтому применяется для контроля эффективности терапии.

Третий ПЦР (генотипирование) уточняет диагноз, устанавливая генотип вируса, что очень важно для назначения правильного противовирусного лечения.

Суть методики полимеразной цепной реакции заключается в использовании ферментов, которые многократно размножают генетический материал возбудителя в биоматериале. В процессе такой репликации пробирку с кровью несколько раз подогревают и охлаждают до температуры, необходимой для ускорения ферментативной реакции. В результате этих манипуляций количество вирусного генома многократно увеличивается, что позволяет его выявить даже при минимальном количестве.

ПЦР диагностика имеет много преимуществ перед другими лабораторными исследованиями:

  • высокая чувствительность – 97-98%;
  • гарантированная аналитическая специфичность (выявляет именно тот возбудитель, который требуется найти, а не его родственный штамм);
  • быстрота проведения (требуется не более 2 суток для получения заключения).

Три вида ПЦР анализов

Качественный ПЦР анализ назначается всем пациентам, у кого ИФА-анализом были выявлены антитела к вирусу ХВГС. После проведения качественного ПЦР может быть получено два варианта ответа: «РНК обнаружено» или «РНК не обнаружено». Чтобы обнаружить в крови минимальное количество вируса, необходимы тест-системы с чувствительностью не менее 50 МЕ/мл. Если концентрация вируса в крови больного будет меньше, чем может определить диагностикум, то результат исследования может быть и ложноотрицательным. Чтобы избежать такой диагностической ошибки, лаборатории, осуществляющие ПЦР-диагностику, должны быть обеспечены высокочувствительными тест-системами. В лаборатории «Инвитро», к примеру, используются тесты с чувствительностью от 15 МЕ/мл. Информацию о чувствительности тестов работники лаборатории обязаны предоставлять пациентам и врачам по их первому требованию.

Количественный анализ ПЦР определяет степень виремии, то есть концентрацию возбудителя в крови, вирусную нагрузку. Результат этого исследования, в отличие от качественного ПЦР, выражается цифрами, например, 2×10*6 МЕ/мл, что означает 2 миллиона международных единиц в 1 мл крови. Часть лабораторий применяет другой показатель – число копий/мл. Эти два показателя легко конвертировать: 1 международная единица равна 4 копиям РНК. Таким образом, 2×10*6 МЕ/мл будет означать, что в крови больного обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл, т.е. 8 млн. копий в 1мл крови.

Генотипирование – это определение одного из шести генотипов вируса. От генотипа возбудителя зависит клиническая картина, скорость развития осложнений со стороны печени и прогноз для дальнейшей жизни пациента. Генотип вируса очень важен уже на стадии постановки диагноза, поскольку от его правильного определения зависит комбинация препаратов и длительность терапевтического курса, который будет назначен больному.

Однако даже такое казалось бы «идеальное» лабораторное исследование имеет свои минусы:

  • в ходе исследования происходит репликация генетического материала всех возбудителей, даже неживых, что может исказить результат. Поэтому для осуществления контроля эффективности с помощью ПЦР повторный анализ проводят не ранее, чем через 2 месяца после предыдущего, чтобы погибшие вирусы успели «покинуть» организм больного;
  • часть вирусного генома, который определяют с помощью тест-систем, теоретически может присутствовать и в других вирусах или микроорганизмах, поэтому есть вероятность ложноположительного ответа;
  • вирусы быстро мутируют. Иногда скорость и степень мутирования вируса настолько высока, что тест-система перестает улавливать их геном. Как следствие, возможен ложноотрицательный результат.

Для нивелирования этих недостатков, производители лабораторных тест-систем для ПЦР диагностики постоянно проводят их испытания, в том числе на перекрестные реакции и на чувствительность к тому или иному генотипу вируса.

Как сдавать анализ ПЦР на гепатит С?

Чтобы заключение обследования методом ПЦР были достоверными, необходимо строго соблюдать правила подготовки к его проведению:

  • исследование проводится на голодный желудок (глюкоза, жиры, минералы, попадающие в кровь из пищи, могут повлиять на скорость и качество ферментной реакции);
  • разрыв между последним приемом пищи и отбором крови для анализа должен составлять не менее 8 часов;
  • накануне исследования запрещено принимать алкоголь и употреблять жирную пищу, период выведения которых затяжной;
  • за сутки до похода в лабораторию следует избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок;
  • до момента забора крови не рекомендуется курить.

Чтобы избежать появления ложных заключений, предполагаемому больному необходимо прийти в лабораторию немного раньше, чем будет проведен забор крови. Нужно 15-20 минут для того, чтобы человек отдышался, успокоился. Адреналин, присутствующий в крови после быстрой ходьбы, может повлиять на результат обследования.

Если направляемый на анализ пациент принимает какие-либо лекарственные препараты, об этом он должен уведомить врача. Вполне возможно, что от приема некоторых из них придется на некоторое время отказаться (если это возможно).

Результат анализа ПЦР на гепатит С

Расшифровкой результатов занимается врач-лаборант той лаборатории, которая проводила анализ. Расшифровка – это определение отклонения полученного результата от нормы. Норма показателей устанавливается непосредственно производителем тест-системы, которая используется лабораторией для диагностики. Поэтому не стоит удивляться, что в одних лабораториях вирусную нагрузку определяют в МЕ/мл, а в других – в копиях/мл.

Получив заключение, его нужно уметь правильно трактовать. Трактовкой результатов исследования должен заниматься лечащий врач больного гепатитом С. Только после объективного, инструментального и лабораторного обследования пациента, врач может получить достаточное количество данных для грамотной трактовки полученных результатов ПЦР.

Оценка качественного анализа, как правило, не вызывает затруднений, даже у пациентов. Результат там может быть только один: «обнаружен» или «не обнаружен». При этом второй из них является нормой.

Показатели количественного анализа трактовать сложнее. Он показывает степень вирусной нагрузки на пациента. Даже среди гепатологов нет единого мнения по поводу того, как трактовать обнаруженную виремию. Большинство врачей склоняются к тому, что высокой нужно считать нагрузку более 8×10*5 МЕ/мл. Очень высокой считается нагрузка более 1×10*7 МЕ/мл, а низкой – менее 4×10*5 МЕ/мл.

Степень вирусной нагрузки говорит о вирулентности (агрессивности) вируса: чем больше его количество в крови, тем быстрее могут развиваться осложнения со стороны печени. Высокая концентрация вируса в крови беременной женщины повышает вероятность его проникновения через гематоплацентарный барьер к плоду. Виремия также влияет на эффективность лечения: при низких цифрах результативность терапии выше, чем при высоких.

Для того, чтобы быть уверенным в достоверности проведенного анализа ПЦР на гепатит С, нужно отдавать предпочтение только тем лабораториям, которые хорошо себя зарекомендовали. Ценовая политика при этом не должна играть первостепенную роль.

Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
Adblock
detector
×
×